嘔吐毒素免疫親和柱是用于檢測食品或飼料中嘔吐毒素（如DON、NIVALENOL等）的關鍵前處理工具，其正確使用直接影響檢測結果的準確性和重復性。以下是詳細的使用要求及注意事項：

　　一、嘔吐毒素免疫親和柱樣品預處理規范

　　1. 提取液選擇與配制

　　根據目標毒素類型選擇合適的溶劑體系（常用甲醇/水或乙腈/水混合液），比例通常為70%-80%有機相。建議現配現用以保證活性，避免長期存放導致分層影響萃取效率。

　　酸性條件下某些基質干擾物溶解度降低，可酌情加入醋酸調節pH至4-5范圍，但需驗證是否影響抗體結合能力。

　　2. 均質與離心參數控制

　　使用高速分散均質機時設置轉速不超過10000rpm，時間控制在2分鐘內防止過熱變性。若采用振蕩提取，則需保持振幅一致性并記錄具體條件以便方法復現。

　　離心步驟推薦相對離心力（RCF）≥5000g持續10分鐘，確保上清液澄清透明無顆粒物殘留。必要時可通過預過濾去除大分子雜質延長柱子壽命。

　　二、嘔吐毒素免疫親和柱操作流程標準化

　　1. 活化與平衡步驟

　　使用時先用5倍體積的洗脫緩沖液沖洗固定相，流速控制在1滴/秒左右。隨后用樣品提取液預平衡至少兩次，每次靜置5分鐘使固相充分飽和。此過程不可省略，否則可能導致回收率下降。

　　2. 上樣技巧與負載量管理

　　將準備好的樣品提取液以自然重力流過柱床，避免施加外力加壓。理想流速維持在0.5-1mL/min范圍內，超速會導致目標物未充分結合即被沖出。

　　嚴格控制最大上樣量（參照說明書標注的最大承載能力），過量加載會引起穿透效應造成損失。一般而言，單支柱子處理樣品量不應超過制造商規定的理論值的80%。

　　3. 洗滌優化策略

　　選用與提取液組成相近但強度稍弱的洗滌液進行梯度淋洗，逐步去除弱吸附干擾物。典型方案包括依次使用含5%、10%、20%有機溶劑的水溶液各5mL分步洗雜。

　　收集少量初段洗脫液進行薄層色譜預試，確定最佳洗滌體積既能有效去雜又不會洗脫目標組分。

　　4. 精準洗脫回收

　　根據目標毒素性質選用適宜的洗脫劑（如甲醇或含一定比例甲酸的乙腈溶液），分步收集洗脫峰以提高富集倍數。建議采用氮吹濃縮而非直接蒸干，減少熱不穩定物質分解風險。

　　對于復雜基質樣本，可采用串聯多根不同類型的SPE小柱進一步凈化，但需注意壓力累積問題。

　　三、嘔吐毒素免疫親和柱質量控制要點

　　1. 交叉污染防控

　　不同濃度級別的標準曲線制備應分別使用專用器具，嚴禁共用移液槍頭導致交叉玷污。實驗結束后立即用純溶劑清洗管路系統直至基線平穩。

　　定期更換接頭處的O型圈等易損耗部件，防止老化開裂引起泄漏污染后續樣品。

　　2. 性能驗證試驗

　　每批次新啟用的免疫親和柱必須通過加標回收實驗確認效能，添加水平涵蓋低、中、高三個濃度梯度。只有當回收率穩定在85%-115%區間內方可投入使用。

　　平行測定精密度應優于RSD≤10%，日內和日間差異均需滿足該方法學要求。

　　3. 儲存條件合規性

　　未開封的產品應在冷藏環境下保存（2-8℃），避免冷凍破壞蛋白質結構。已激活使用的柱子若短期不用可置于4℃冰箱保濕存放，長期閑置則需干燥密封后室溫保存。